作者：李亚，王玉明，王丹，贺勇

【摘要】 目的：探讨汉族人群腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ABCA1）基因单核苷酸多态性（SNP）与血浆载脂蛋白A1（apoA1）水平的关系. 方法 ：选取ABCA1基因R219K, V825I, M883I和R1587K等4个编码区SNPs，采用PCR限制性片断长度多态性 分析 技术确定376名健康个体基因型；用THESIAS程序分析SNPs的连锁不平衡关系及单倍型. 结果：受检人群中，4种SNPs各自不同基因型个体间apoA1水平差异均未见统计学意义（P＞0.05）. R219K与M883I, V825I与M883I以及V825I与R1587K两两间存在连锁不平衡(P<0.01). 以V825I 和R1587K 构建的两位点单倍型中，IK单倍型携带者apoA1水平较VR单倍型携带者显著降低(P<0.05). 结论：ABCA1基因V825I和R1587K多态性与汉族人群血浆apoA1水平变化有关，但这种关联取决于该两个SNPs间形成的单倍型.

【关键词】 ABCA1基因；载脂蛋白A1；单倍体型；连锁不平衡

0引言

血浆高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotEin cholesterol，HDLC）水平降低是冠心病的独立危险因素之一［1］. 腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ATPbinding cassette transporter A1，ABCA1）介导胆固醇、磷脂从肝外组织的流出，并通过与载脂蛋白A1（apolipoprotEIn A1，apoA1）相互作用，在胆固醇逆向转运和高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein，HDL）生成的起始阶段发挥着关键的作用，因此，ABCA1被认为是决定HDLC水平的主要因素之一［2］. 群体遗传学 研究 表明，ABCA1基因的某些单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）可改变ABCA1蛋白活性并由此引起HDLC水平变化，从而 影响 个体对冠心病的易感性［3-4］. 然而，有关ABCA1基因SNPs对血浆apoA1水平影响的研究报道却相对缺乏.为此我们在本研究中探讨了ABCA1基因4种SNPs及其构成的单倍型与汉族人群apoA1水平变化的关系.

1对象和方法

1.1对象来自四川大学华西 医院 和成都医学院第一附属医院无血缘关系的四川地区汉族体检个体376（男194，女182）例，年龄(58.4±8.6)岁，apoA1水平（1.324±0.186） g/L，体质量指数（24.62±3.39） kg/m2，总吸烟率为27%，并经询问病史、体检、心电图等检查排除心血管疾病史.

1.2方法

1.2.1标本采集与处理禁食12 h后抽取研究对象外周血5 mL，采用免疫比浊法并按试剂盒（上海荣盛生物技术公司）推荐条件测定血浆apoA1水平；另采集外周血3 mL，1 mL ACD抗凝，盐析法提取DNA，TE缓冲液溶解DNA并置于4 ℃冰箱中备用.

1.2.2多态位点的基因型分型采用PCR限制性片断长度多态性分析法对4个SNPs进行分型. 首先，参照基因组序列（GenBank登录号：NM005502）设计合成相应PCR引物，对受检者ABCA1基因R219K，V825I，M883I和R1587K等4个SNPs位点所包含的DNA序列进行扩增；再取扩增产物15 μL，分别加入4 U限制性内切酶和2 μL 酶切缓冲液，并加超纯水至总体积20 μL，37℃水浴中保温16 h；最后，消化产物经30 g/L琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像系统分析电泳结果，判定个体基因型. PCR反应条件、限制性内切酶以及各基因型酶切情况见表1.表1ABCA1基因SNPs的基因型分型

统计学处理：每个SNP的HardyWeinberg平衡检验用χ2检验，在HWE软件上进行. 单个SNP位点基因型与apoA1水平的关系分析采用协方差分析（用SPSS10.0软件）. SNPs间配对连锁不平衡估算以及各种单倍型与apoA1水平的关联分析均使用THESIAS程序进行. apoA1水平用x±s表示；除连锁不平衡检验用α=0.001为检验水准外，其余统计学分析均以P≤0.05为差异有统计学意义.

2结果

2.1等位基因和基因型的频率分布经χ2检验，4种SNPs各基因型频率在本研究人群中分布符合HardyWeinberg平衡（P＞0.05），表明本研究样本具有群体代表性. 其中，变异型等位基因K219和I825的频率高于欧美人群（0.452 vs 0.27, 0.323 vs 0.056，P＜0.01）；而I883等位基因在欧美人群则为野生型等位基因［5］ （表2）. 表24种多态位点等位基因和基因型频率

2.24种SNPs不同基因型与apoA1水平的关系分析为准确地反映不同基因型对血浆apoA1水平的影响，我们采用了协方差分析，以排除各种混杂因素对研究结果的影响. 校正协变量（年龄、吸烟和体质量指数）后的结果显示，R219K, V825I, M883I和R1587K多态各自不同基因型个体间apoA1水平差异均无统计学意义（P＞0.05, 表3）. 表34种多态位点不同基因型个体间apoA1水平比较

2.3配对连锁不平衡分析ABCA1基因4个SNPs位点的配对连锁不平衡用统计量D′表示（D′=D/Dmax）. 表4可见，在全部6个配对组合中，V825I分别与M883I和R1587K间存在较强的连锁不平衡（D′>0.7）. 此外，在R219K和M883I间也检测到有统计学意义的连锁不平衡（D′=0.572）. 值得注意的是，在R219K至R1587K位点约1.36 kb范围内，我们未发现2个以上的SNPs位点彼此间的连锁不平衡关系.